1）被检血清的稀释

一般情况，牛、马和骆驼用1∶50，1∶100，1∶200和1∶400四个稀释度。猪、山羊、绵羊和狗用1∶25，1∶50，1∶100，1∶200四个稀释度。大规模检疫时也可用两个稀释度既牛、马和骆驼为1∶50，和1∶100；猪、山羊、绵羊和狗1∶25和1∶50。

2）血清稀释（以羊、猪为例）和加入抗原的方法

每份血清用5支小试管（口径8～10 mm），第1管加入2.3 mL石炭酸生理盐水，第2管不加，第3、第4和5管各加入0.5mL。用1mL吸管吸取被检血清0.2mL，加入第1管中，并混合均匀。

混匀后，以该吸管吸取混合液分别加入第2管和第3管，每管0.5 mL。以该吸管将第3管的混合匀吸取0.5 mL加入第4管混匀后，又从第4管吸出0.5 mL加入第5管，第5管混匀完毕弃0.5 mL。如此稀释之后，从第2管起血清稀释度分别为1∶12.2，1∶25，1∶50和1∶100。

血清规定用0.5%石炭酸生理盐水稀释，但检验羊血清时用0.5%石炭酸10%盐水溶液稀释。

加入抗原的方法：先以0.5%石炭酸生理盐水将抗原原液作20倍稀释（如果血清用0.5%石炭酸10%盐水溶液稀释则抗原原液也用0.5%石炭酸10%盐水稀释），然后加入上述各管（第1管不加，留作血清蛋白凝集对照），每管0.5 mL，振摇均匀，加入抗原后，第2管至第5管各管混合液的容积均为1 mL，血清稀释度从第2管起依次变为：1∶25，1∶50，1∶100，1∶200。

牛、马和骆驼血清稀释和加抗原的方法与上述一致，不同的是，第1管加2.4 mL0.5%石炭酸生理盐水和0.1 mL被检血清，加抗原后从第2管到第5管血清稀释度为1∶50，1∶100，1∶200和1∶400。

3）对照管的制作

每次试验须作3种对照各1份。(www.daowen.com)

阴性血清对照：阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同。

阳性血清对照：阳性血清对照稀释到原有滴度，加抗原的方法与被检血清相同。

抗原对照（了解抗原是否有自凝现象）：加1∶20抗原稀释液0.5 mL于试管中，再加0.5 mL 0.5%石炭酸生理盐水（如果血清用0.5%石炭酸10%盐水溶液稀释则也加入0.5%石炭酸10%盐水溶液）。

4）比浊管的制作

每次试验须配制比浊管作为判定清亮程度（凝集反应程度）的依据，配制方法如下：取本次试验用的抗原稀释液（即抗原原液的20倍稀释液）5～10 mL加入等量的0.5%石炭酸生理盐水（如果血清用0.5%石炭酸10%盐水稀释，则加入0.5%石炭酸10%盐水溶液）作对倍稀释，然后按表9.12配制比浊管。

表9.12　比浊管的配制

5）记录结果

全部试管充分振荡后，置37℃温箱中22～24 h后，用比浊管对照并记录结果。