1）鸡胚的选择和孵化

应选择健康无病鸡群或SPF鸡群的新鲜受精蛋。为便于照蛋观察，以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。用孵化箱孵化，要注意温度、湿度和翻蛋。孵化最低温度为36℃，一般为37.5℃，相对湿度为60%。每日最少翻蛋3次。

发育正常的鸡胚照蛋时可见清晰的血管及鸡胚的活动。不同的接种材料需不同的接种途径，不同的接种途径需选用不同日龄的鸡胚。卵黄囊接种，用6～8日龄鸡胚；绒毛尿囊膜接种，用9～13日龄的鸡胚；绒毛尿囊腔接种，用9～12日龄的鸡胚接种；血管注射，用12～13日龄的鸡胚；羊膜腔和脑内注射，用10日龄的鸡胚。

2）接种前的准备

（1）病毒材料的处理

怀疑污染细菌的液体材料，加抗生素（青霉素1 000 IU/mL和链霉素1 000μg/mL）置室温1 h或4℃冰箱12～24 h，高速离心，取上清液，或经细菌滤器滤过除菌。如为患病动物组织，应剪碎、匀浆、离心后取上清液，必要时加抗生素处理或过滤除菌。若用新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗，则无菌操作用生理盐水将其稀释100倍。

（2）照蛋

以铅笔划出气室、胚胎位置及接种的位置，表明胚龄及日期，气室朝上立于蛋架上。尿囊腔接种选9～12日龄的鸡胚，接种部位可选择在气室中心或远离胚胎侧气室边缘，避开大血管。(www.daowen.com)

（3）鸡胚的接种

以新城疫病毒的绒毛尿囊腔接种为例，在接种部位先后用5%碘酊棉及75%酒精棉消毒，然后用灭菌锥子打1个孔，一次性1 mL注射器吸取新城疫病毒液垂直或稍斜插入气室，刺入尿囊腔，向尿囊腔内注入0.1～0.3 mL。注射后，用熔化的蜡封孔，置温箱中直立孵化3～7 d。孵化期间，每6 h照蛋1次，观察胚胎存活情况。弃去接种后24 h内死亡的鸡胚，24 h以后死亡的鸡胚应置0～4℃冰箱中冷藏4 h或过夜（气室朝上直立），一定时间内未致死的鸡胚也放冰箱冻死。

（4）鸡胚材料的收获

原则上接种什么部位，收获什么部位。

绒毛尿囊腔接种新城疫病毒时，一般收获尿囊液和羊水。将鸡胚取出，无菌操作轻轻敲打并揭去气室顶部蛋壳及壳膜，形成直径1.5～2.0 cm的开口。用灭菌镊子夹起并撕开或用眼科剪剪开气室中央的绒毛尿囊膜，然后用灭菌吸管从破口处吸取尿囊液，注入灭菌青霉素或试管内。然后破羊膜收获羊水，收获的尿囊液和羊水应清亮，浑浊说明有细菌污染。收获的病毒经无菌检验合格者冷冻保存。用具消毒处理，鸡胚置消毒液中浸泡过夜或高压灭菌，然后弃掉。

注意事项：鸡胚接种需严格无菌操作，以减少污染。操作时应细心，以免引起鸡胚的损伤。病毒培养时应保持恒定的适宜条件，收毒结束，注意用具、环境的消毒处理。