微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一。由于菌体很小，只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。目镜测微尺［图9.3（a）］是一块圆形玻片，在玻片中央把5 mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中间像重叠）来测量经显微镜放大后的细胞物像。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。镜台测微尺［图9.3（b）］是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将1 mm等分为100格，每格长10μm（即0.01 mm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小。所以，用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。

图9.3　目镜测微尺与镜台测微尺

（a）目镜测微尺；（b）镜台测微尺

1）血球计数板的计数原理

显微镜直接计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法，由于此法记录的是样品中活菌体和死菌体的总和，故又称总菌计数法。常用的细胞计数器有血球计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，都可用于酵母菌、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。不同的是后两者较薄，计数室的总体积为0.02 mm3，盖玻片与载玻片之间的距离只有0.02mm，因此可以用油镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。(www.daowen.com)

本实验以血球计数板进行显微镜直接计数。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间较宽的平台又被一短槽隔成两半，每一边的平台上各有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。计数室的刻度一般有两种规格：一种是一个大方格（计数室）分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格（计数室）分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。无论哪一种规格的计数板，计数室的小方格数都是相同的，即都是16×25=400个。计数室的边长为1 mm，则其面积为1 mm2，每个小方格的面积为1/400 mm2。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片间的高度为0.1 mm，因此，计数室的容积为0.1 mm3，每个小方格的体积为1/4 000 mm3。计数时，通常是数4或5个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25或16，就得到了一个大方格（计数室）的总菌数，然后再换算成1 mL（1 mL=1 000 mm3）菌液中的总菌数（图9.4）。

图9.4　血球计数板的构造

（a）纵切面图；（b）正面图；（c）放大的方格网；（d）放大的计数室