烟气剂量的实时监测和精准控制是影响气-液界面暴露实验结果可靠性的一个重要因素。烟气气溶胶在通过全烟气暴露系统时会发生凝结和沉积,另外,不同暴露系统的沉积效率也有所不同。因此,吸烟机上设定的暴露浓度常常与实际细胞暴露剂量不同。目前有许多物理的、化学的和重力学的方法来检测烟草烟气的体外暴露剂量,大多数的方法都有局限,并且对于剂量的定量分析还没有一个普遍一致的最合适的方法。
化学分光荧光分析法是对颗粒沉积进行量化的一种方法[28]。简而言之,在暴露装置中放置的经预先润湿的细胞培养小室暴露在整个主流烟气中。沉积的烟气颗粒物使用高效液相色谱级甲醇和搅拌法进行萃取,并用高效液相色谱法和荧光检测法采用标准校准曲线对其进行分析[21,62]。这种方法虽然不是实时的,但提供了一种简单的量化剂量方法,并已在各种研究中得到应用。这种湿化学法的优点是它可以应用于任何暴露系统/暴露模块(从小的孔板到皮式培养皿),结果应该是相对一致的,并且可以在不同的实验室间进行比较。
光散射光度计可以被用来进行烟气体外暴露实验的剂量学测定。光度计是通过光散射光学传感器对悬浮在气体中的微粒液滴(称为光学焦油)进行在线测量,能够以非常低的流速测量光密度,而不会对粒子质量造成任何损失,已经被用于各种各样体内和体外毒性评价的研究[39,63]。Okuwa等通过使用便携式光度计实时地监测并量化了进入暴露舱的烟气颗粒物的剂量。然而,光度计技术具有其局限性,其中一个限制是,这些光度计必须精确地与已知的微粒质量进行校准;在线微粒测量的结果并不总是接近于(虽然可能会提示)在气-液界面上沉积的质量。(www.daowen.com)
石英微量天平技术(Quartz Crystal Microbalance,QCM)近年来也被应用于烟气颗粒物的剂量学测定。Adamson等[21,22,24,62]使用QCM分别与BAT气-液界面暴露系统和VITROCELL暴露系统结合,进行暴露仓内烟气剂量的定量测定。QCM可以获得暴露仓内烟气颗粒物的实时浓度,为毒性试验的测试结果提供剂量学数据支持,更准确地描述烟气的生物毒性效应。不同国家/地区实验室的VITROCELL暴露系统的烟气剂量学测试比对实验结果显示,获得的剂量-效应关系结果具有非常好的一致性,该暴露系统对烟气剂量控制的稳定性良好,适合烟草烟气的体外暴露测试[64]。有文献报道,生物学分析结果如中性红细胞毒性测试结果和Ames测试结果与暴露系统内QCM检测的气-液界面处烟气颗粒物的沉积质量之间具有正相关关系[64]。
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