细胞凋亡（apoptosis）是指细胞在基因及相关信号通路调控下自主地有序地死亡。细胞凋亡的检测方法^[51]包括：

（1）线粒体膜电位检测 线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential，ΔΨ_m）是指跨越线粒体内膜两侧的电化学势，ΔΨ_m的改变与细胞凋亡密切相关，引起ΔΨ_m改变的因素均有可能导致细胞凋亡的发生，ΔΨ_m的改变发生在细胞凋亡最早期，早于磷脂酰丝氨酸外翻、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活化及核酸酶的激活。

（2）磷脂酰丝氨酸外翻检测 磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）位于细胞膜内侧，是细胞膜磷脂的重要组成成分。在细胞发生凋亡的早期，细胞内ATP供能不足，胞浆Ca²⁺浓度升高，氨基磷脂转移酶（Aminophosphatidyl Transferase，APT）活性下降，导致PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面。PS外翻是细胞早期凋亡最明显的标志，可用AnnexinV联合碘化丙啶（PI）染色法对此进行检测。

（3）细胞色素C的定位检测 正常情况下，细胞色素C定位于线粒体膜间隙，与线粒体内膜外侧松弛结合，且不能通过外膜。细胞凋亡引起细胞色素C释放到胞质，caspases-3活化，进一步激活下游的caspase-3、6、7，引发级联反应。

（4）caspase-3活性检测caspase通常以酶原形式存在，被激活后可介导蛋白酶级联反应，是凋亡信号通路的执行者。其中caspase-3 是关键的凋亡效应分子，在死亡受体途径、线粒体途径及内质网途径中均发挥功能。

（5）细胞凋亡形态检测 细胞凋亡形态学特征性改变包括细胞体积变小、胞膜皱缩、核质浓缩、胞膜起泡（bubbling）以及出现凋亡小体等。

（6）DNA片断检测细胞凋亡引起内源性核酸内切酶激活，基因组DNA降解形成约 180～200bp或其整数倍的DNA片段，进行凝胶电泳后可得到DNA梯状条带（DNA ladder），可用于细胞凋亡判断。(www.daowen.com)

（7）细胞膜通透性检测 在细胞凋亡晚期，细胞膜的通透性增加，外部物质可以透过细胞膜进入细胞内部，检测细胞通透性变化的方法多依据此原理进行设计。

目前，国内外也有关于卷烟烟气对细胞凋亡影响的研究。CSC染毒的研究总结如表2.1所示。

图2.3 免疫荧光分析结果（绿色AIF信号与蓝色核染色共定位）^[14]

表2.1 国内外卷烟烟气冷凝物的细胞凋亡研究

续表

注：*LC3-II（自噬体特异性形式）与LC3-I（细胞浆形式）的比值是诱导自噬的指标之一。