【重点内容】

检测原理、结果判定。

【教学目标】

1．知识目标

熟悉人食用含有盐酸克伦特罗残留产品后的中毒症状。熟悉盐酸克伦特罗胶体金检测卡的检测原理。

2．技能目标

掌握盐酸克伦特罗残留胶体金快速筛选检测法，并能对结果进行准确判定。

技 能 单

胶体金检测卡用于测尿液、肉、饲料盐酸克伦特罗残留。

盐酸克伦特罗俗称瘦肉精，为一种人工合成的β-肾上腺素能兴奋剂，具有扩张支气管的作用。当人食用含有盐酸克伦特罗残留的产品后的中毒症状为心动过速、低血钾、低磷酸盐血症、肌肉震颤、头晕、口干、失眠甚至瘫痪等。国家已经明令禁止克伦特罗在动物饲养中使用。而检测卡常用于盐酸克伦特罗残留的快速筛选检测。胶体金检测卡结构如图5-10所示。

图5-10　胶体金检测卡结构

一、检测原理

胶体金检测卡采用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、饲料和肉等组织中的盐酸克伦特罗。胶体金检测卡含有被预先固定于膜上检测带（T）的盐酸克伦特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克伦特罗单克隆抗体和固定于膜上控制带（C）的二抗。利用竞争法胶体金免疫层析技术，检测液中的盐酸克伦特罗与金标垫上的金标抗体结合形成复合物，若盐酸克伦特罗在检测液中浓度低于灵敏度值，未结合的金标抗体流到T区时，与被固定在膜上的盐酸克伦特罗-BSA偶联物结合，逐渐凝集成一条可见的T线；若盐酸克伦特罗浓度高于灵敏度值，金标抗体全部形成复合物，不会再与T线处盐酸克伦特罗-BSA偶联物结合形成可见T线。未固定的复合物流过T区被C区的二抗捕获，金颗粒沉积，形成紫红色可见的C线。C线出现表明免疫层析发生，即试纸有效。盐酸克伦特罗胶体金检测卡检测原理如图5-11所示。

图5-11　盐酸克伦特罗胶体金检测卡检测原理

二、试剂

纯水。

三、仪器与材料

检测卡、离心管、烧杯、超声波水浴箱、尿液、肉样、饲料。

四、方法与步骤

（一）样品制备

1．尿液

样本必须用洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器收集。可直接检测，如有浑浊须先离心取上清液。若不能及时检测送检，则尿样样本在2 ℃～8 ℃冷藏可以保存48 h。长期保存需冷冻于-20 ℃，忌反复冻融。尿样检测限为5 μg/g（5 ppb）。

2．肉

装入大约4 g碎的猪肉样本（肉泥）于离心管，盖紧管盖，在80 ℃左右的水浴锅中水浴10 min；吸取煮出的溶液到1.5 mL的离心管。如有明显黄色浑浊需离心，则用上清液作为待测样品溶液。肉样等组织检测限为7 μg/g（7 ppb）。

3．饲料

取1 g样品粉末于离心管，加入5 mL水，混匀，置于超声波水浴中超声30 min（每10 min取出混匀1次），超声提取后冷却至室温，以3 000 r/min的转速离心5 min，取上清液进行测试。饲料检测限为5 μg/g（5 ppb）。

（二）操作步骤

（1）在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。

（2）撕开铝塑袋，取出试纸。(www.daowen.com)

（3）依据型号进行操作（尿液不得直接浸湿观察区）。

①将试纸白色一端浸入尿液（液面不得超过横线），保持5 s。

②用滴管吸取待检样品尿液，逐滴缓慢加入3滴样品于加样孔。

（4）将试纸平放1 min，等待红色条带出现。

（5）3～8 min内读取结果，10 min后判读无效。

（6）10 min内可以检测出结果。

（三）结果判定

阳性：位置C显示出红色条带，位置T无条带时判为阳性。

阴性：位置C显示出红色条带，位置T同时出现红色条带时，判为阴性。

无效：位置C不显示出红色条带，则无论位置T显示出红色条带与否，该试纸卡均判为无效。

注意：测试区（T）内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是，在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也都应判定为阴性结果。

（四）注意事项

（1）按照操作步骤进行测试，勿触摸检测卡中央的白色膜面。

（2）检测时避免阳光直射和电风扇直吹。

（3）检测卡在保质期内一次性使用，勿重复使用。

（4）用PBS配制标准品，自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。

（5）尿样滴管不可混用，以免交叉污染。如果尿样出现沉淀或浑浊物，则离心后再检测。

（6）出现阳性结果，用本卡复查一次。

五、实训报告

根据检测结果写出实训报告。

评 估 单

【评估内容】

【评估方法】

以操作过程是否规范为主，评价动手操作能力。

备注：项目二十七学习情境占模块五总分的5%。