【重点内容】

乳房炎乳的检验。

【教学目标】

掌握乳房炎乳的检验方法。

技 能 单

一、检验方法

乳房炎乳中含有溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和大肠埃希氏菌等致病菌及小球菌、芽孢菌等腐败菌，严重影响乳的卫生质量。奶牛乳房发生炎症时，上皮细胞坏死、脱落进入乳汁，乳中白细胞数增加，甚至有血和脓。因此，收购生乳时应加强乳房炎乳的检验。乳房炎乳常用的检验方法有凝乳检验法、血与脓的检出、体细胞计数、电导率测定。此外，可采用溴麝香草酚蓝法（BTB）、过氧化氢酶法、CMT法等检验乳房炎乳。

1．凝乳检验法

【试剂】

凝乳检验试剂：称取60 g碳酸钠（Na2CO3·10H2O，化学纯）溶于100 mL蒸馏水，搅拌、加温、过滤；称取40 g无水氯化钙溶于300 mL蒸馏水，搅拌、加温、过滤；将两种滤液混合、搅拌、加温、过滤后加入等量15%的氢氧化钠溶液，继续搅拌、加温、过滤，即检验用试剂。试剂加入溴甲酚紫于试液，有助于结果的观察。试液宜在棕色瓶中储存。

【仪器】

平皿（白色）、吸管。

【操作方法】

取乳样3 mL于白色平皿，加0.5 mL试液，立即回转混合，10 s后观察结果。

【结果判定】

判定标准见表4-50。

表4-50　凝乳检验法检验乳房炎乳的判定标准

2．血与脓的检出

【试剂】

联苯胺试剂：吸取2 mL96%乙醇溶液于试管，加入少量联苯胺，混匀，加2 mL 3%过氧化氢溶液，摇匀，再加入3～4滴冰乙酸。

【操作与结果】

在联苯胺试剂中，加入4～5mL牛乳，20～30 s后，如果乳中有血和脓存在，则液体呈深蓝色。

3．体细胞计数

乳中细胞含量的多少是衡量乳房健康状况及乳卫生质量的标志之一。国际标准中正常牛乳中体细胞含量一般每毫升不超过20万个，20万个细胞为亚临床乳房炎的临界值，当奶牛患有乳房炎时，乳中体细胞数每毫升超过20万个。为了防止乳房炎乳混入原料乳，可采用体细胞计数法检测乳房炎乳。推荐使用体细胞计数仪进行乳汁体细胞计数。体细胞计数法有直接计数法和间接计数法。直接计数法中简便易行的方法是直接用显微镜进行体细胞计数（SCC），间接计数法就是CMT法。

【试剂】

亚甲蓝染色液、二甲苯、95%乙醇。

【仪器】

生物显微镜、载玻片、10 μL微量加样器。

【操作方法】

（1）涂片制备。充分摇匀新鲜乳样，用微量加样器吸取中部乳汁10 μL，将乳样滴于玻片上，涂布成约1 cm2面积的乳膜；将涂好的玻片于37 ℃恒温箱中干燥，取出后用二甲苯脱脂 5 min，再置于95%乙醇中固定5～10 min后取出，待玻片干燥后用亚甲蓝染色液染色 5 min，水洗，再用95%乙醇脱色数分钟，水洗干燥后镜检。

（2）镜检计数。在生物显微镜油镜下观察，计数100个视野内的细胞数，然后用下式计算：

SCC=500 000×每个视野的细胞平均数（即细胞总数÷100）=细胞数/mL乳

【结果判定】

判定标准：每毫升牛奶中含20万个细胞为亚临床乳房炎的临界值（±）；超过该值为阳性（+），低于该值则正常（-）。

4．CMT法

亚临床乳房炎的检验方法有很多，有物理性方法、化学性方法和细胞学方法。临床上常采用的方法有加利福尼亚州法（CMT）、威斯康星测定法（SMT）、日本乳房炎检验法（PLT）、魏氏测定法、淡麝香草酚蓝试验（BTM）、上海乳房炎检验法（SMT）、兰州乳房炎检验法（LMT）、北京乳房炎检验法（BMT）、黑龙江乳房炎检验法（HMT）等。各种方法的检出率较接近。CMT法是加利福尼亚州法的简称，该法是国际通用的隐性乳房炎诊断方法。其原理是用表面活性物质和碱性药物破坏乳中体细胞，使之释放出DNA，并进一步作用，使乳汁产生沉淀或形成凝胶，体细胞数越多，产生的沉淀或凝胶也越多，从而间接诊断乳房炎和炎症的程度。

【试剂】

CMT检验液：十二烷基磺酸钠30 g溶解于1 000 mL蒸馏水，用2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至6.4，加入溴甲酚紫0.1 g，混匀备用。(www.daowen.com)

【仪器】

乳房炎诊断盘。

【操作方法】

取乳房炎诊断盘1只，滴加被检乳2 mL、CMT检验液2 mL，立即回转混合，10 s后观察结果。

【结果判定】

判定标准见表4-51。

表4-51　 CMT法检验隐性乳房炎乳的判定方法及标准

5．电导率测定

【原理】

正常牛乳的电导率为0.004～0.005　S/cm。患乳房疾病时，乳中盐类含量增加，电导率增高为0.006　5～0.013　0　S/cm。因此，可用电导率仪测定乳的电导率来检测乳房炎乳。

【仪器】

奶牛乳房炎检测仪。

【操作方法及结果判定】

（1）直接从奶牛乳头将奶牛样品挤入顶端管道漏斗形状的开口，需要最小量为2　mL（挤一次或两次）。

（2）仪器上有0～9的刻度线，读数越高，表示电解质含量也越高。

（3）读数在5以下，表示奶牛健康，没有感染乳房炎。

（4）读数在5或5以上，说明对应的乳区感染了隐性乳房炎。

（5）同一头奶牛的某个乳区的读数比其他三个乳区高2个单位时，即使读数在2～4之间，也认为该头奶牛的该乳区感染了隐性乳房炎。

（6）设备中有自动净化系统，检测不同奶牛或不同乳区时不需要专门清洗，只需要在全部检测完之后用清水进行简单的冲洗。

二、实训报告

根据实际检测方法写出被检乳样检验结果，并给出处理意见。

作 业 单

1．乳房炎乳常用的检验方法有（　　）、（　　）、（　　）、（　　）、（　　）。

2．乳房炎乳属于异常乳，因乳中含有（　　）、（　　）、（　　）、（　　）等致病菌及　（　　）、（　　）等腐败菌，严重影响乳的卫生质量。

3．奶牛乳房发生炎症，（　　）细胞坏死、脱落进入乳汁，（　　）细胞增加，甚至有血和脓。

4．正常牛乳中体细胞含量一般每毫升（　　）20万个。

5．正常牛乳的电导率为0.004～0.005　S/cm。奶牛患乳房疾病时，乳中（　　）增加，电导率增高。

6．奶牛患有乳房炎时，乳中体细胞数每毫升（　　）20万个。为了防止乳房炎乳混入原料乳中，可采用（　　）计数法检测乳房炎乳。

评 估 单

【评估内容】

1．简述凝乳法检验乳房炎乳的判定标准。

2．如何检验乳中的血与脓？

3．如何进行牛乳中的体细胞计数？

【评估方法】

以小组为单位进行评估，每组推选2人，随机抽2题进行回答，采用百分制进行评价。

备注：项目二十二任务三学习情境占模块四总分的5%。