【基本概念】

金黄色葡萄球菌

【重点内容】

1．金黄色葡萄球菌检验的食品卫生学意义。

2．金黄色葡萄球菌检验程序。

【教学目标】

1．知识目标

熟悉金黄色葡萄球菌的特点，掌握金黄色葡萄球菌检验的食品卫生学意义。

2．技能目标

会进行金黄色葡萄球菌检验并根据国家标准判定结果。

资 料 单

一、金黄色葡萄球菌检验国家标准的适用范围

金黄色葡萄球菌检验国家标准适用于各类食品和食物中毒样品中金黄色葡萄球菌的检验。

二、金黄色葡萄球菌的特点

葡萄球菌是最常见的化脓性球菌之一，在自然界中分布广泛，大多数为腐物寄生菌，有一部分为致病性葡萄球菌。其鉴别要点如下：

（1）形态与颜色。单个菌体呈球形。无鞭毛，无芽孢，一般不形成荚膜，易被碱性染料着色，革兰氏染色阳性。

（2）培养特性。本菌为需氧或兼性厌氧，对营养要求不高，在普通肉汤培养基中即能生长，最适宜温度为37 ℃，最适宜pH值为7.4。在肉汤中呈均匀浑浊生长，并有管底沉淀现象。在普通琼脂平板上可形成圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明的菌落。在血液琼脂平板上多数致病性葡萄球菌呈金黄色，有时呈白色，大而凸起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈，非致病性葡萄球菌则无溶血现象。在卵黄高盐琼脂平板上，由于致病性葡萄球菌能产生卵磷脂酶，而使菌落周围形成白色沉淀圈。葡萄球菌在固体培养基上，因菌种不同而产生不同的色素，如金黄色、白色及柠檬色等。

某些菌株耐盐性强，在含10%～15%氯化钠的培养基中仍能生长，如在高盐甘露醇平板上分解甘露醇的葡萄球菌菌落呈淡橙黄色，大部分革兰氏阴性杆菌在此培养基上不生长。常用甘露醇高盐培养基作为葡萄球菌选择培养基。

（3）生化反应。本菌触酶试验阳性，大多数菌株能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。致病性葡萄球菌大多能分解甘露醇产酸，非致病性葡萄球菌无此作用。

葡萄球菌致病力的强弱与其产生毒素及酶类有关，主要是溶血毒素、肠毒素、血浆凝固酶、透明质酸酶、DNA分解酶、磷酸酶、卵磷脂酶等。对不同毒素和不同酶类的测定，有助于致病性葡萄球菌的识别。

三、金黄色葡萄球菌检验的食品卫生学意义

金黄色葡萄球菌可以产生肠毒素，食用后能引起食物中毒，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生的一种潜在危险。因此，检查食品中金黄色葡萄球菌有实际意义。

技 能 单

一、材料与设备

1．样品

奶、肉、蛋等。

2．菌种

金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌。

3．培养基与试剂

7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker琼脂平板、糖（葡萄糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖）培养基、胰酪胨大豆肉汤培养基、新鲜兔血浆、革兰氏染色液等。

4．器具及其他用品

无菌吸管、无菌试管、显微镜、恒温箱、离心机、无菌平皿、载玻片、酒精灯、接种环、均质器等。

二、流程

金黄色葡萄球菌检验操作流程如图3-20所示。

图3-20　金黄色葡萄球菌检验操作流程

三、方法与步骤

（一）一般培养

在225 mL无菌生理盐水中加入25 g固体样品，制成混悬液。液体样品可不稀释。吸 取5 mL上述混悬液，接种于50 mL胰酪胨大豆肉汤或7.5%的氯化钠肉汤中置37 ℃恒温箱培养 24 h后观察现象。将上述培养物直接在血琼脂平板和Baird-Parker琼脂平板划线分离，置37 ℃恒温箱培养24 h，同时做对照试验。

（二）分纯培养及生化试验

在上述平板上挑取可疑菌落及对照菌种进行革兰氏染色，同时做生化试验，即接种环不灭菌直接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖培养基中。

葡萄球菌在肉汤中呈均匀浑浊现象，在血琼脂平板上多数致病性葡萄球菌呈金黄色，也有时呈白色，大而凸起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈，非致病性葡萄球菌则无溶血现象。在Baird-Parker琼脂平板上为圆形，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在其外层有一透明圈，光滑凸起，湿润的菌落。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度。葡萄球菌在肉汤中呈浑浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈浑浊生长。

染色镜检可看到呈葡萄串状，菌体呈球形的革兰氏阳性菌。无鞭毛，无芽孢，一般不形成荚膜。生化试验结果为分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。

若出现上述菌落特征及生化试验现象应判为疑似金黄色葡萄球菌，则最后做血浆凝固酶试验加以确定。

（三）血浆凝固酶试验

挑取上述可疑菌落和金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌已知对照菌落分别接种于三管肉浸液中，37 ℃培养24 h。吸取1∶4新鲜兔血浆0.5 mL，放入已盛有培养24 h后的可疑金黄色葡萄球菌肉浸液的小试管，振荡摇匀，同时做对照试验，最后一同放入37 ℃恒温箱或水浴箱内，每0.5 h观察1次，观察6 h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时呈现凝块者，被认为是阳性结果，最好以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。(www.daowen.com)

四、实训报告

详细记录试验结果，根据细菌的形态特征及在血琼脂平板和Baird-Parker琼脂平板上的生长情况和血浆凝固酶试验，判别检样是否有金黄色葡萄球菌。

备注：

1．胰酪胨大豆肉汤

（1）成分：胰酪胨（或胰蛋白胨）17 g，植物蛋白胨（或大豆蛋白胨）3 g，氯化钠100 g，磷酸氢二钾2.5 g，葡萄糖2.5 g，蒸馏水1 000 mL。

（2）制法：将上述成分混合，加热并溶解，调节pH值至7.3±0.2后分装，于121 ℃高压灭菌15 min。

2．血琼脂平板

（1）成分：豆粉琼脂（pH值7.4～7.6）100 mL，脱纤维羊血（或兔血）5～10 mL。

（2）制法：加热溶化琼脂，冷却至50 ℃，以无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。

3．Baird-Parker琼脂平板

（1）成分：胰蛋白胨10.0 g，牛肉膏5.0 g，酵母膏1.0 g，丙酮酸钠10.0 g，甘氨酸12.0 g，氯化锂（LiCl·6H2O）5.0 g，琼脂 20.0 g，蒸馏水950 mL。

增菌剂的配法：30%卵黄盐水50 mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液 10 mL混合，保存于冰箱。

（2）制法：将各成分加到蒸馏水，加热溶解，调节pH值至7.0±0.2。分装后121 ℃高压灭菌15 min。临用时加热融化琼脂，冷至50 ℃，每95 mL 加入预热至50 ℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5 mL 摇匀后倾注平板。

4．兔血浆

取柠檬酸钠3.8 g，加蒸馏水100 mL，溶解过滤分装后于121 ℃高压灭菌15 min。

兔血浆制备：取3.8%柠檬酸钠溶液一份，加兔全血四份，混好静置（或以3 000 r/min的转速离心30 min）可得血浆。

作 业 单

一、判断

1．多数致病性葡萄球菌在血琼脂平板上呈金黄色，有时呈白色，大而凸起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。　　　（　　）

2．非致病性葡萄球菌在血琼脂平板上也有溶血圈形成。　　　（　　）

3．致病性葡萄球菌大多能分解甘露醇产酸，非致病性葡萄球菌无此作用。　　　（　　）

二、简答

1．金黄色葡萄球菌在Baird-Parker琼脂平板上的菌落特征如何？

2．鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标是什么?

3．金黄色葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特征如何？

评 估 单

【评估内容】

一、填空

1．葡萄球菌（　　）鞭毛，（　　）芽孢，一般不形成荚膜，革兰氏染色（　　）性。在肉汤中呈均匀浑浊生长，并有（　　）现象。

2．现常应用（　　）培养基作为葡萄球菌选择培养基。

二、简答

1．简述金黄色葡萄球菌检验的食品卫生学意义。

2．金黄色葡萄球菌在卵黄高盐琼脂平板上的菌落特征如何？

3．简述金黄色葡萄球菌的检验程序。

三、操作

对鲜售乳进行金黄色葡萄球菌的检验，并写出检验报告。

【评估方法】

以小组为单位进行评估。主要是在试验过程中进行，检查各小组是否做到防止微生物散布，是否掌握金黄色葡萄球菌检验的整个操作过程，同时对各小组人员随机抽取2人进行提问，提问分数以2人平均分数计。

优：小组能独立正确地完成各项工作，并能回答问题。

良：小组能独立正确地完成大部分工作，个别环节仍需提示才能完成。

及格：小组能基本完成大部分工作，其他环节有错误。

不及格：小组不能独立完成各项工作，没有试验现象。

备注：项目十七任务六学习情境占模块三总分的6%。